Изучение противовирусной активности препарата «Гриппферон», капли в нос

in vitro.

 

Как показали исследования in vitro, Гриппферон оказался эффективным в отношении следующих вирусов:

    1. Вирусов гриппа:
    • А/Красноярск/18/05 (H1N1)
    • А/СПб/03/05 (H1N1)
    • А/Красноярск/8/05 (H1N1)
    • А/Новосибирск/5/05 (H1N1)
    • А/Panama/2077/99 (H3N2)
    • А/Panama/2007/2001 (H3N2)

    2. Аденовируса человека (AdV 6)

    3. Коронавируса человека HCoV/SPb/01/03 (229Е)

    4. Респираторно-синцитиального вируса, штамм Rendall

    5. Вируса парагриппа 2 типа, штамм ПГ2/СПб5/11/03

    6. Вируса краснухи штамм «Орлов»

    7. Вакцинного штамма вируса кори Эдмонстон

    8. Вакцинного штамма вируса эпидемического паротита Л-3

    9. Вирусов птичьего гриппа

    • подтип Н5N2 А/Duck/Sigaроге/R/F119-3/97
    • подтип H5N1 А/Курица/Курган/Россия/2/2005

1. Вирус гриппа

В ГУ НИИ гриппа РАМН (Санкт-Петербург) были проведены исследования  противовирусной активности препарата Гриппферон в отношении вируса гриппа А:  А/Panama/2007/2001 (H3N2).

В качестве культуры ткани использовали фрагменты переживающих хорионаллантоисных оболочек куриных эмбрионов. Их помещали в лунки панели, содержащие по 0,5 мл поддерживающей среды, а через час в каждую лунку вводили 0,4 мл раствора исследуемого препарата и 0,6 мл вируссодержащей среды с 1-107 ЭИД50 вируса  (эмбриональная инфицирующая доза, необходимая для инфицирования 50% зараженных эмбрионов). Полученную культуральную жидкость выдерживали 48 ч при температуре 37о С, и затем в лунки добавляли по 0,5 мл 1%-ой суспензии куриных эритроцитов в физиологическом растворе. Эффективность препарата определяли по снижению инфекционной активности вируса в опыте по сравнению с контролем.

Было показано, что присутствие Гриппферона вызывало дозозависимое снижение инфекционных титров вируса гриппа А/2007/2001 H3N2) в культуре клеток вплоть до концентрации 125 МЕ/мл, составившей ED50.

2. Аденовирус человека.

Для определения противовирусного действия препарата «Гриппферон»  в отношении аденовируса человека (AdV6) были проведены исследования в НИИ гриппа РАМН (Санкт-Петербург).

Культуру клеток МА-104 заражали серийными десятикратными разведениями вируса от 10-1 до  10-4. Было показано, что «Гриппферон» подавлял как прямую репликацию аденовируса в культуре, так и снижал инфекционность вирусного потомства. В той или иной степени этот эффект сохранялся до концентраций 63 и 16 МЕ/мл соответственно. В использованных концентрациях препарат оказался нетоксичным для клеток МА-104. Химиотерапевтический индекс «Гриппферона» (отношение максимальной переносимой его концентрации к минимальной действующей концентрации) составил минимум 32, что является высоким показателем для химиопрепаратов.

Полученные данные позволили судить о том, что «Гриппферон» обладает мощным вирусингибирующим действием в отношении аденовируса человека 6 типа, которое проявлялось существенным дозозависимым снижением продукции вирусного белка под действием препарата.

3. Коронавирус человека.

Весной 2003 г. в разгар эпидемии SARS («атипичной пневмонии») в НИИ гриппа РАМН (г.Санкт-Петербург) по заказу биотехнологической компании «ФИРН М» были проведены специальные исследования по изучению противовирусной активности препарата «Гриппферон», капли в нос, в отношении коронавируса человека HCoV/SPb/01/03 (229Е).

В экспериментах использовали фибробласты легкого человека и коронавирус человека, который был выделен в 2003 г. от ребенка с кишечной и респираторной патологией. Вирус пассирован на культуре клеток фибробластов легкого человека и идентифицирован в реакции связывания комплемента с референс-сыворотками как человеческий коронавирус 229Е. Противовирусное действие препарата определяли по разнице титров  вируса в опыте и контроле, которую выражали в lg СТD50.

Было доказано, что «Гриппферон» подавлял как прямую репликацию коронавируса в культуре, так и снижал инфекционность вирусного потомства. Этот эффект сохранялся до концентрации 125 и 100 МЕ/мл соответственно

Химиотерапевтический индекс препарата, вычисленный на основании приведенных данных, составил 10.

Результаты исследований, проведенных в НИИ гриппа РАМН, позволили рекомендовать Министерству здравоохранения Российской Федерации (Постановление Главного Государственного Санитарного Врача РФ от 04.04.03 г. № 26 и письмо от 30.04.2003 № 2519/4695-03-27) препарат Гриппферон для экстренной и плановой профилактики SARS («атипичной пневмонии»).

4. Вирус гриппа птиц.  

В связи с угрозой возникновения эпидемии птичьего гриппа в 2003 г. в НИИ гриппа было проведено исследование суммарного вирусингибирующего эффекта препарата Гриппферон в отношении вируса гриппа птиц в культуре клеток.

Вирус гриппа птиц А/Duck/Sigaроге/R/F119-3/97 (Н5N2) был получен из коллекции вирусов СDС (Atlanta, USA) и пассирован в аллантоисной полости 10-12 дневных куриных эмбрионов (в культуре клеток МDСК).
Противовирусное действие препарата определяли по разнице титров вируса в опыте и контроле, которое выражали в lg СТD50.

Гриппферон стабильно подавлял репликацию вируса в клетках МDСК, о чем свидетельствовало снижение титров вируса, определяемых как по ЦПД, так и по реакции гемагглютинации. Ни одна из концентраций препарата, вплоть до 2000 МЕ/мл, не оказывала токсического действия на клетки МDСК. Химиотерапевтический индекс препарата (отношение максимальной переносимой его концентрации к минимальной действующей концентрации) составлял в клеточной культуре минимум 133, что является относительно высоким показателем для химиопрепаратов. Способность Гриппферона подавлять репродукцию вируса гриппа птиц стала основанием для включения препарата в государственный резерв основных средств на случай эпидемии гриппа.

Оценку специфической противовирусной активности препарата Гриппферон в отношении вируса гриппа А подтипа Н5N1(штамм А/курица/Курган/Россия/2/2005) проводили на культуре клеток в Вирусологическом центре НИИ микробиологии Министерства Обороны РФ

Было установлено, что Гриппферон в концентрации не менее 3300 МЕ/мл эффективно подавлял репродукцию вируса гриппа А подтип Н5N1 в культуре клеток MDCK при внесении препаратов за 4 часа до инфицирования, а также через 2 часа после инфицирования монослоя.

Химиотерапевтический индекс Гриппферона составил не менее 10, что позволяет характеризовать его как обладающий специфической противовирусной активностью и низкой токсичностью.

Изучение противовирусной эффективности препарата в отношении экспериментальной формы гриппа А подтипа Н5N1 показало, что Гриппферон обоснованно включен в государственный резерв основных средств, необходимых для профилактики и лечения гриппа.

 
© 2003-2013 FIRN M - All Rights Reserved
Москва, 127018, ул. Октябрьская, 6
т./ф.:(495) 956-1543 e-mail: firnm@atom.ru